如何觀察轉基因植物的GFP發光檢測方法?
轉基因植物的GFP發光檢測能用手持式雙波段熒光蛋白激發燈、手電筒式熒光蛋白激發燈、體視顯微鏡用熒光蛋白激發燈等多種光源可以激發,熒光蛋白的激發波長通常在450-480nm,發射波長在520-550nm,增強型熒光蛋白的激發波長在485nm,熒光蛋白激發燈能夠滿足綠色熒光蛋白和紅色熒光蛋白激發觀察。
轉基因植物的GFP發光檢測能用什么燈直接觀察么?
什么是GFP? 在生物學研究中有何用途?
GFP是綠色熒光蛋白(Green fluorescent protein, GFP),簡稱GFP,20世紀60年代在水母中發現的發光蛋白。由238氨基酸組成的單鏈多肽,在藍光或紫外光激發下發出綠色熒光,可以起到標記目的基因的作用。
GFP主要使用什么顏色的激發光?你觀察到得熒光是什么顏色?
GFP在藍光或紫外光激發下發出綠色熒光。綠色熒光蛋白基因是目前應用的報告基因之一,檢測方便,只需激發光源,不需任何底物或輔助因子;材料可活體觀測,無需預處理;植物本身無綠色熒光,不會有假陽性。因此,它目前在動物、植物、微生物的研究中已得到廣泛的應用。
植物病毒表達載體(GFP或eGFP,RFP),農桿菌侵染植株后,如果要觀察GFP發光,需要選用激發光源來照射植物,同時需要佩戴專用的熒光觀察眼鏡,即可觀察到明亮的GFP熒光。的雙波段光源能夠激發GFP,eGFP和RFP,無論是綠色熒光蛋白還是增強型綠色熒光蛋白以及紅色熒光蛋白,均能夠激發出明亮的熒光,如果需要拍照,需要選用專用遮光片才可以拍到熒光。
GFP作為一種新型的基因報告分子,可用于活體、原位、即時的檢測基因表達及蛋白定位。不象其他生物 發光基因報告分子需要附加蛋白或底物、輔物、輔因子等才會發光。GFP非常穩定,不依賴于物種,對活細胞沒有傷害性。由于這種載體在轉染細胞后很快就能通過觀察熒光細胞而檢測出基因的表達情況,因而,為基因轉染研究中確定轉染效率。在轉基因作物的基因表達研究中,GFP(綠色熒光蛋白)可作為非常重要的衡量工具。通過定點觀察GFP,可有利于學習如何操縱和提高有用的染色體特性,從而可以篩選出高基因表達的植物。可提高農作物產量、質量,并不斷適應人們對糧食的更高需求。